Aplicações Terapêuticas de Tecnologias Baseadas em Ácidos Nucleicos
Objetivos
Objetivos
- Compreender os principais conceitos sobre a biogénese e metabolismo do RNA em eucariotas
- Compreender o conceito de silenciamento génico; identificar as caraterísticas principais de vetores virais para terapia génica;
- Compreender o conceito de doenças humanas RNA dominantes
- Conhecer os principais métodos de envio e introdução de ácidos nucleicos em células eucariotas
- Compreender os princípios de funcionamento, vantagens e limitações das principais tecnologias de investigação de interação entre ácidos nucleicos e proteínas
- Compreender os princípios de funcionamento das tecnologias de hibridação de ácidos nucleicos com especial ênfase em microarrays e sua aplicação em medicina personalizada.
- Conhecer os fundamentos da tecnologia de RNA seq e sua aplicação em medicina personalizada.
- Ser capaz de executar técnicas de transfeção de ácidos nucleicos, preparação de extratos celulares, síntese de cDNA, PCR e Western blot.
Caracterização geral
Código
12366
Créditos
6.0
Professor responsável
Celso Cunha
Horas
Semanais - 3
Totais - A disponibilizar brevemente
Idioma de ensino
Português
Pré-requisitos
Obrigatória a frequência de 2/3 das Unidades de Aprendizagem para obtenção de aproveitamento.
Bibliografia
Artigos selecionados
O’Driscoll CM et al. (2019) Oral delivery of non-viral nucleic acid-based therapeutics - do we have the guts for this? European Journal of Pharmaceutical Sciences Volume 133, 15 May 2019, Pages 190-204
Nakamori, M. et al. Nucleic Acid–Based Therapeutics for Parkinson’s Disease Neurotherapeutics (2019) 16: 287.
Watts, J.K.et al.. Nucleic Acid Therapeutics for Neurological Diseases Neurotherapeutics (2019) 16: 245.
Chen, J.et al. Nucleic Acid-Based Therapeutics for Pulmonary Diseases AAPS PharmSciTech (2018) 19: 3670.
Livros:
Advances in Nucleic Acid Therapeutics (2019). Editors: Sudhir Agrawal, Michael J Gait. Royal Society of Chemistry. ISBN-13: 978-1788012096
Advances in Nanomedicine for the Delivery of Therapeutic Nucleic Acids (2017). Edited by: Surendra Nimesh, Ramesh Chandra and Nidhi Gupta. Woodhead Publishing. ISBN 978-0-08-100557-6
Método de ensino
A disponibilizar brevemente
Método de avaliação
A disponibilizar brevemente
Conteúdo
Programa teórico: Conceitos básicos da biologia do RNA em eucariotas. Metodologias de transfeção de ácidos nucleicos; siRNA e shRNA para silenciamento génico; terapias baseadas em silenciamento génico; vetores virais. Metodologias para investigação de interações entre ácidos nucleicos e proteínas; imunoprecipitação, pull-down, purificação por afinidade com aptámeros de MS2 e tobramicina, pull-down de RNA biotinilado, cromatografia RADAR, CLIP. Análise de microarrays e RNA seq para diagnóstico em medicina personalizada.
Programa prático: Cultura in vitro de células eucariotas. Transfeção de células eucariotas com siRNA. Preparação de extratos celulares totais de células transfetadas; Extração de RNA total de células transfetadas. Síntese de cDNA e PCR. Análise dos resultados do PCR por eletroforese em gel de agarose. Western blot: SDS-PAGE para análise de extratos celulares totais; transferência de proteínas para membrana; deteção de proteínas com anticorpo específico.